臨床上，對乙酰氨基酚（APAP）是應(yīng)用廣泛的 解熱鎮(zhèn)痛藥，但其大劑量服用或聯(lián)合使用則會誘發(fā)藥 物性肝損傷，嚴(yán)重者可導(dǎo)致肝衰竭甚至死亡。據(jù)美國 食品藥品監(jiān)督管理局統(tǒng)計，過量服用含 APAP 的藥品 是導(dǎo)致患者肝衰竭最主要的因素。JNK2 為 c-Jun 氨 基末端激酶（JNK）的亞型之一，幾乎在所有的細(xì)胞 中均有表達(dá)。研究表明，JNK2 基因敲除對腫瘤壞死 因子（TNF）介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，從而 推測 JNK2 在 APAP 誘導(dǎo)的肝損傷中發(fā)揮重要作用。中醫(yī)學(xué)根據(jù)藥物性肝損傷的臨床特點，將其 歸屬于“黃疸”“積聚”等范疇，而肝失疏泄、氣滯 血瘀、脾失健運、濕濁內(nèi)生為其主要的發(fā)病機(jī)制，疏 肝健脾、活血祛瘀、解毒除濕為其有效治法。

清潔級Wistar大鼠70只，雌雄各半，體質(zhì)量180～ 220 g，北京維通利華生物技術(shù)有限公司提供，動物質(zhì) 量合格證號 11400700181914，動物生產(chǎn)許可證號 SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于河北省中藥配方顆粒 工程技術(shù)研究中心動物室（萬級潔凈屏障系統(tǒng)），溫 度（23±2）℃，相對濕度 60%～70%，12 h 明暗交 替，自由攝食飲水。

解毒護(hù)肝方（柴胡 10 g，醋香附 15 g，白術(shù) 10 g， 炒白芍 15 g，五味子 10 g，黃芪 15 g，茵陳 15 g，黃 芩 10 g，丹參 15 g，楮實子 10 g，田基黃 15 g，甘草 10 g），飲片均為免煎顆粒，四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展 有限公司。水飛薊賓膠囊（每粒含水飛薊賓 35 mg， 批號 750709172），天津天士力圣特制藥有限公司；對 乙酰氨基酚片（每片含 APAP 0.5 g，批號 016171002）， 石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司

AST 測定試劑盒（批號 AUZ3645）、ALT 測定試 劑盒（批號 AUZ3689），貝克曼庫爾特實驗系統(tǒng)有限 公司；總膽紅素（TBIL）試劑盒（批號 A005）、直接 膽紅素（DBIL）試劑盒（批號 A006），長春匯力生物 技術(shù)有限公司；TNF-α（批號 T15030357）、白細(xì)胞介 素-6（IL-6，批號 S01030358），武漢華美生物工程有 限公司；Trizol（批號 139603），Invitrogen 公司； TIANScript cDNA 第一鏈合成試劑盒（批號 P5011）、 SuperReal PreMix Plus（SYBR Green，批號 Q5922）， 天根生化科技（北京）有限公司；JNK2 兔多抗、p-JNK2 （Tyr185）兔單抗，Cell Signaling Technology 公司； β-actin 小鼠單抗、辣根酶標(biāo)記山羊抗兔 IgG（H+L）、 Peroxidase-Conjugated Goat anti-Rabbit IgG（H+L）、 辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠 IgG （ H+L ）、 Peroxidase-Conjugated Goat anti-Mouse IgG（H+L）、 TLR3 兔多抗（批號 00009333）、二抗（Goat，批號 K186817A），DAB（批號 K186916P），北京中杉金橋 生物技術(shù)有限公司。Humalyzer2000 半自動生化儀（德 國豪邁），DP73 數(shù)碼顯微鏡（日本 Olympus）， HMIAS-2000 顯微圖像分析系統(tǒng)（武漢同濟(jì)醫(yī)科大 學(xué)），酶標(biāo)儀（BioTek，ELx800），熒光定量 PCR 儀 ABI7500（Applied Biosystems），電泳儀（北京百晶生 物技術(shù)有限公司），生物分光光度計（Eppendorf），電 泳槽（美國 BioRad），轉(zhuǎn)移脫色搖床（海門其林貝爾儀器制造公司），Tanon Gis 電泳圖像分析系統(tǒng) （Tanon1600），Quantity one 分析軟件（Bio Rad Technical Service Department）。

大鼠每日灌胃 APAP 1200 mg/kg 藥液（40 ℃生 理鹽水配制）1 次，連續(xù) 30 d，制作大鼠肝損傷模 型。將成模大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、陽性 對照組和解毒護(hù)肝方高、中、低劑量組，每組 12 只， 另取 10 只大鼠為正常組，雌雄各半。解毒護(hù)肝方高、 中、低劑量組分別給予 63、31.5、15.75 g 原藥材/kg 藥液灌胃，陽性對照組給予水飛薊賓（44 mg/kg）藥 液灌胃，正常組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃。 給藥體積均為 1 mL/100 g，每日 1 次，連續(xù) 30 d。實驗期間每 7 d 稱重 1 次，自由攝食飲水。

正常組大鼠毛發(fā)滑順、有光澤，精神狀態(tài)良好， 行動靈活，二便正常；模型組大鼠體質(zhì)量減輕，毛發(fā) 無光澤，精神狀態(tài)欠佳，喜臥；各給藥組大鼠毛發(fā)光 澤度、精神狀態(tài)、體質(zhì)量及行動靈活性均有改善。

與正常組比較，模型組大鼠 ALT、AST、DBIL 水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模 型組比較，陽性對照組和解毒護(hù)肝方中、低劑量組大 鼠 ALT、AST 活性顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05，P＜0.01），解毒護(hù)肝方低劑量組大鼠 DBIL 含 量顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與解毒 護(hù)肝方高劑量組比較，解毒護(hù)肝方中劑量組大鼠 ALT、AST 活性顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05，P＜0.01）。

正常組大鼠肝細(xì)胞排列整齊，圍繞中央靜脈放射 狀排列，細(xì)胞核形態(tài)正常，胞漿均勻，無變性及壞死； 模型組大鼠肝細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞呈現(xiàn)廣泛水腫變性，散在少量點狀壞死；解毒護(hù)肝方高、中、低劑量 組較模型組大鼠細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂有不同程度的改善，局部細(xì)胞水腫變性，未觀察到點狀壞死，以中、低劑量 組改善尤為明顯。

臨床上常用 ALT 和 AST 作為反映肝細(xì)胞損傷程 度的生化指標(biāo)。正常情況下，二者在血清中含量很低， 但當(dāng)肝細(xì)胞受到損傷時，細(xì)胞發(fā)生變性及壞死，細(xì)胞 膜通透性增加或發(fā)生崩解，ALT、AST 釋放入血，血 中 ALT、AST 活性升高。 DBIL 能溶于水，可通過腎臟隨尿液排出體外。 在發(fā)生廣泛的肝損傷或直接抑制膽汁轉(zhuǎn)運蛋白時會 使 TBIL 含量升高。當(dāng)發(fā)生紅細(xì)胞破壞過多或肝細(xì)胞 對膽紅素出現(xiàn)轉(zhuǎn)運、結(jié)合、排泄缺陷以及膽管阻塞時， 亦可導(dǎo)致膽紅素代謝障礙。實驗結(jié)果顯示，模型組大 鼠肝組織 ALT、AST、DBIL 水平顯著升高，提示肝 損傷模型建立成功；與模型組比較，陽性對照組和解 毒護(hù)肝方中、低劑量組均能顯著降低大鼠肝組織 ALT、AST 活性，解毒護(hù)肝方低劑量組又能顯著降低 大鼠肝組織 DBIL 含量；各給藥組均能不同程度降低 大鼠肝組織 TBIL 含量，但各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）。提示各給藥組對損傷的肝細(xì)胞均有不同 程度的改善作用，尤以解毒護(hù)肝方中、低劑量組效果為佳。



 

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