動脈粥樣硬化 ( atherosclerosis，AS) 是心腦 血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，而肝臟脂質(zhì)沉積是導致 AS 發(fā)生的一個重要病理環(huán)節(jié)，因此改善肝臟脂 質(zhì)沉積對防治 AS 具有重要意義。化瘀祛痰方為課 題 組 研 制 多 年 的 專 利 方 ( 專 利 號: ZL200710010845. 9) ，對 防 治 AS 具 有 很 好 的 療 效。前期研究發(fā)現(xiàn)，化瘀祛痰方在改善血脂異 常、肝臟脂質(zhì)沉積方面效果顯著。

1 材料及方法

1. 1 動物

健康 SPF 級雄性新西蘭白兔 60 只，體質(zhì)量 ( 2. 2 ± 0. 2) kg，購于濟南金豐實驗動物有限公司， 實驗動物合格證號 SCXK ( 魯) 2014-0006。動物 飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心，SPF 級，溫 度 ( 22 ± 2) ℃，濕度 ( 50 ± 6) % 。

1. 2 藥物與試劑

化瘀祛痰方由黨參 30 g、絞股 藍 30 g、黃 芪 30 g、茯 苓 15 g、郁 金 15 g、法 半 夏 15 g、丹 參 15 g、川芎 20 g、石菖蒲 20 g 組成，統(tǒng)一由遼寧中 醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院實驗中心提供并煎煮。辛伐他汀 ( 杭州默沙東制藥有限公司，批號 L036325) ; 過硫 酸銨 ( 北京索萊寶科技有限公司，批號 A8090) ;兔 IL-18 Elisa 試劑盒 ( 批號 ml027833) 、兔 IL-1β Elisa 試劑盒 ( 批號 ml027836) ，上海酶聯(lián)生物科 技 有 限 公 司; BCA 蛋白定量試劑盒 ( 批 號 CW0014S) 、蛋白裂解液 ( 批號 CW2333) 、一抗稀 釋液 ( 批號 CW2340S) 、ECL 化學發(fā)光試劑 ( 批號 CW0049、CW2340) ，均為康為世紀生物科技有限 公司; 黑素瘤缺乏因子 2 ( AIM2 ) 抗 體 ( 批 號 AＲP50505) 、Caspase-1 抗 體 ( 批 號 AＲP58983 ) 、 gasdermin D 蛋 白 ( GSDMD ) 抗 體 ( 批 號 OACA03071) ，Aviva Systems Biology 公司; 含 NLＲ 家族 Pyrin 域蛋白 3 ( NLＲP3) 抗體 ( Bioss，批號 bs-23723Ｒ ) ; β-actin 抗 體 ( Abbkinet， 批 號 A01010) ; 牛 血 清 白 蛋 白 ( BSA，Sigma，批 號 5329846) ; OCT 包埋劑 ( Sakura，批號 4583) ; 油 紅 O 染液 ( 批號 G1016) 、甘油明膠封片劑 ( 批號 G1402) 、蘇木素染液 ( 批號 G1004) ，武漢谷歌生 物科技有限公司; 伊紅染色液 ( 碧云天生物科技 有限公司，批號 C0109) ; 水合氯醛 ( 上海源液生 物科 技 有 限 公 司，批 號 S24149 ) 、4% 多 聚 甲 醛 ( Solarbio，批號 P1110) 。高脂飼料配方: 1. 5% 膽 固醇、1% 膽鹽、3% 豬油、3% 花生油、5% 蛋黃 粉，加 86. 5% 普通飼料，原材料采購于北京索萊 寶科技有限公司，由沈陽于洪前民動物飼料加工中 心制成顆粒。

1. 3 儀器

垂直 電 泳 槽 ( 型 號 1658001 ) 、轉(zhuǎn) 移 電 泳 槽 ( 型號170-3932) 、電泳儀( 型號 PowerPacTM Basic) ， 均為 Bio-Ｒad 公 司 產(chǎn) 品; 多功能全波長酶標儀 ( Molecular Devices，型號 Molecular Devices spectraMax i3) ; 水浴恒溫振蕩器 ( 其林貝爾儀器制造有限公司，型號 SHZ-88) ; 高速冷凍離心機 ［賽默飛 世 爾 科 技 ( 中 國 ) 有 限 公 司， 型 號 Thermo ST16Ｒ］; 化學發(fā)光成像系統(tǒng) ( 上海天能科技有限 公司，型 號 Tanon-5200 ) ; 熒 光 顯 微 鏡 ( 型 號 DM6B) 、組織包埋機 ( 型號 EG 1150H) 、石蠟切 片機 ( 型 號 ＲM2235) 、烘 片 機 ( 型 號 HI1220 ) 、 攤片機 ( 型號 HI1210) ，均為 Leica 公司產(chǎn)品; 干 式恒 溫 器 ( 杭州奧盛儀器有限公司，型 號 MK20) ; 冷凍切片機 ( Thermo，型號 Cryotome E) 。

1. 4 動物分組及干預方法

本實驗選取對膽固醇飲食敏感 ( 進食高膽固 醇飼料后，短時間形成高膽固醇血癥) 的家兔為 研究對象，易于形成 AS 模型，運用高脂飼料喂養(yǎng) 結(jié)合免疫損傷方法建立動脈粥樣硬化模型。60 只新西蘭白兔采用隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、化瘀祛痰方組及辛伐他汀組，每組 15 只。各 組先給予普通飼料喂養(yǎng) 2 周，隨后空白組繼續(xù)喂養(yǎng) 普通飼料，其他各組改喂高脂飼料同時耳緣靜脈一 次性注射牛血清白蛋白 250 mg / kg，以病理形態(tài)學 檢測發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)斑塊及血脂異常 ［以總膽固醇 ( TC) 值高于正常組均值的 6 倍視為血脂異常］ 為造模 成功的標準。8 周后采用隨機數(shù)字表法抽取 2 只 家兔，取主動脈檢測斑塊形成情況評估造模是否成 功。模型組家兔主動脈內(nèi)觀測到動脈內(nèi)皮增厚，管 腔變窄，動脈壁內(nèi)附著大量泡沫細胞及脂質(zhì)沉積， 脂質(zhì)條紋明顯，說明復制 AS 模型成功，并經(jīng)耳緣 靜脈采集所有家兔血液檢測血脂變化情況。造模成 功后化瘀祛痰方組給藥劑量 16 g /( kg·d) ，辛伐他 汀組給藥劑量 1. 4 mg /( kg·d) ，空白組與模型組 給予 8 ml /( kg·d) 的生理鹽水，各組連續(xù)灌胃 4 周。

2 結(jié)果

空白組家兔肝細 胞索條理清晰排列整齊，肝竇正常，核圓、大、居 中; 模型組肝細胞體積增大，腫脹變圓，胞漿內(nèi)出 現(xiàn)大量脂肪空泡，脂肪變性明顯，肝細胞排列雜 亂; 與模型組相比，化瘀祛痰方組肝細胞的體積大 小有所恢復，細胞腫脹明顯減輕，空泡變少，肝細 胞脂肪變性程度減輕; 辛伐他汀組肝細胞排列整 齊，未見顯著細胞腫脹，空泡樣變明顯減輕。空白組家兔肝細胞內(nèi)無橘 紅色脂滴; 模型組胞漿內(nèi)有大量橘紅色脂滴蓄積，脂肪變性明顯; 與模型組相比，化瘀祛痰方組和辛 伐他汀組肝細胞內(nèi)橘紅色脂滴均明顯減少; 化瘀祛 痰方組與辛伐他汀組間未見顯著差異。與空白組比較，模型組肝臟組織及血 清中 IL-18 和 IL-1β 含量均顯著升高 ( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ; 與模型組比較，化瘀祛痰方組及辛伐 他汀組肝臟肌組織及血清 IL-18 和 IL-1β 含量均顯 著下降 ( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) 。化瘀祛痰方組與 辛伐他汀組間差異無統(tǒng)計學意義 ( P ＞ 0. 05) 。與空白組 比較，模型組肝臟組織 AIM2、Caspase-1、GSDMD 及 NLＲP3 蛋白均顯著升高 ( P ＜ 0. 01) ; 與模型組 比較，化瘀祛痰方組及辛伐他汀組肝臟組織 Caspase-1、GSDMD 及 NLＲP3 蛋 白 均 顯 著 下 降 ( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，AIM2 蛋白表達差異無統(tǒng) 計學意義 ( P ＞ 0. 05) 。化瘀祛痰方組與辛伐他汀 組 AIM2、Caspase-1、GSDMD 及NLＲP3蛋白表達差 異無統(tǒng)計學意義 ( P ＞ 0. 05) 。

3 討論

AS 是一種慢性進展性動脈血管損傷疾病，是 誘發(fā)心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)。AS 屬中醫(yī)學 “心悸” “胸痹”等范疇，脾失健運、痰瘀互結(jié)是 AS 發(fā)生發(fā)展的核心病機，治以益氣健脾、化 瘀祛痰之法。脾主運化，脾虛津液不得運化轉(zhuǎn)而為痰，阻礙氣機，血因氣阻日久成瘀，瘀血阻絡，津 行受阻聚而為痰，形成痰瘀互結(jié)，阻于脈內(nèi)最終導 致 AS 的發(fā)生。臨床上應用健脾祛痰化瘀方藥治 療 AS 疾病也取得良好療效。