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其林貝爾

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大鼠發病機制分析(其林貝爾振蕩儀使用)

返回列表 來源:未知 發布日期:2020-03-16 09:24【

1 材料和方法 


1.1 實驗動物 


健康雄性 Wistar 大鼠,體質量 180~220 g,由北京維通利華動物實驗中心提供,動 物合格證編號:SCXK(京)2016-001。飼養于天津市南開醫院實驗動物中心。 


1.2 實驗主要試劑與儀器 


末端脫氧核苷酸轉移 酶介導的缺口末端標記測定(Tunel)試劑盒購自瑞 士 Roche 公司;Akt 抗體、p -Akt 抗 體、Bax 抗 體、 Bcl -2 抗 體 、Caspase -3 抗 體 均 購 自 Cell signal technology 公司;二喹啉甲酸(BCA)蛋白濃度測定試 劑盒(Thermo 公司)、渦旋振蕩儀(其林貝爾儀器制造有限公司)、低溫高速離心機(Eppendorf 公司)、電 泳儀(美國 GE 公司)、轉膜儀(美國 GE 公司)。 


1.3 實驗方法


大鼠實驗期間保持 自由飲水和進食,飼養環境溫度為(24±1)℃,濕度 為 55%±5%,實驗前適應性喂養 1 周。根據隨機數字表將 115 只大鼠分為空白組 (15 只)、假手術組 (20 只)、痰濁組(20 只)、血瘀組(30 只)、痰瘀互結 組(30 只)。空白組、假手術組和血瘀組用普通飼料 喂養 8 周。痰濁組和痰瘀互結組用高脂飼料喂養 8 周,第 49 天目內眥取血,剔除血脂未升高的大鼠。 第 54 天,血瘀組和痰瘀互結組行冠狀動脈左前降 支結扎術,假手術組只穿線,不結扎。實驗過程中剔 除不符合標準的大鼠,并記錄死亡情況。8 周末大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛麻醉,腹主動脈取血后生理鹽水沖洗心 臟,剪取心臟,-80 ℃冰箱保存待測。


2 結果


空白組和假手術組未見明顯細胞 凋亡,與假手術組相比,痰濁組、血瘀組和痰瘀互結 組大鼠心肌細胞凋亡數目增加,痰濁組大鼠心肌可 見少量細胞凋亡,血瘀組和痰瘀互結組大鼠心肌組 織存在大量細胞凋亡。與假手術組相比,空白組大鼠 Akt、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表達水 平和 Bax/Bcl-2 比值無統計學差異,p-Akt 蛋白表達 水平明顯升高(P<0.01);血瘀組和痰瘀互結組大鼠 Akt、p-Akt 和 Bcl-2 蛋白表達水平明顯降低(P<0.05 或 P<0.01);Bax 和 Caspase-3 蛋白表達水平明顯升 高(P<0.05 或 P<0.01)。


3 討論 


CHD 屬中醫“胸痹”范疇,《金匱要略·胸痹心痛 氣短脈證治》中記載:“師曰:夫脈當取太過不及,陽 微陰弦,即胸痹而痛,所以然者,責其極虛也。”提出 胸痹的病機為“陽微陰弦”,中醫證型多屬本虛標 實,虛實夾雜的復合證型。《癥因脈治》云:“胸痹之 因,飲食不節,饑飽損傷,痰凝血滯,中焦混濁,則悶 食悶痛之癥作矣。”表明“痰濁”和“血瘀”為 CHD 重 要的致病因素。






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